postupak ekstrakcije silymarina
Silimarin, mješavina flavonolignans izlažu mnoge farmakološke aktivnosti, dobiva se iz plodova mlijeka čička (Silybum marianum L. Gaertner). Zbog visokog sadržaja lipida u plodovima čička, Europska farmakopeja preporučuje proces ekstrakcije u dva koraka. Prvo, plodovi se oklevetaju 6 h, koristeći n-heksan; drugi, silymarin se ekstrahira metanolom još 5 sati.
Predstavljeni podaci pokazuju da se ovaj iznimno dug tradicionalni proces ekstrakcije Soxhleta može skratiti na nekoliko minuta pomoću ekstrakcije tekućine pod tlakom (PLE). PLE također omogućuje uklanjanje faze defattinga potrebne u tradicionalnom postupku, čime se pojednostavljuje postupak ekstrakcije silymarina i sprječava gubitak silymarina uzrokovan defattingom. PLE oporavak dobiven pod optimiziranim uvjetima ekstrakcije očito je bolji od onih dobivenih postupkom ekstrakcije Soxhlet koji je preporučila Farmakopeja.
PLE prinosi silychristina, silydianina, silybina A, silybina B, izosilybina A i izosilybina B u acetonu su 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 odnosno 1,5 mg/g plodova koji nisu oklevetani. 5-h Soxhlet ekstrakcija s metanolom na oklevetanog voća daje samo ∼72% silymarin iznos dobiven u 10 min PLE na 125 °C.
Što je Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, koji se obično nazivamlijeko čička, blagoslovljeno mlijeko čička, Marian Thistle, Mary Thistle ili Saint Mary's Thistle, godišnja je ili dvogodišnja biljka iz obitelji Asteraceae. Biljka, koja izvorno raste u južnoj Europi i Aziji, sada se nalazi u cijelom svijetu (1). Ovaj uznemirujući takav se uzgoj trenutno uzgaja kao ljekovita biljka i jedan je od najvažnijih ljekovitih usjeva u Europi.
Mlijeko čička se koristi u medicinske svrhe za više od 2000 godina, najčešće za liječenje bolesti jetre (ciroza i hepatitis), kao i za zaštitu jetre od toksičnih tvari (2-5). Nedavni istraživački interes za ovu biljku potaknut je studijama koje pokazuju iznimno visoku antitumornu aktivnost. Ekstrakti iz biljke sada su pod intenzivnim ispitivanjem u eksperimentalnoj kemoprevenciji raka, te u melioraciji nuspojava kemoterapije (6). Nedavna izvješća pokazala su da ekstrakte iz ove biljke karakteriziraju i mnoge druge farmakološke aktivnosti, kao što su protuupalno i antifibrotsko djelovanje (2, 7, 8).
Silymarin, mješavina flavonolignans izlažu mnoge farmakološke aktivnosti, dobiva se iz sjemena mlijeka čička (Silybum marianum L. Gaertner). Uobičajeni postupci koji se do sada koriste za ekstrakciju silymarina temelje se uglavnom na sporim metodama ekstrakcije otapala visoke temperature. Nedostaci povezani s tim tehnikama doveli su do traženja novih alternativnih postupaka ekstrakcije koji bi se dodatno mogli poboljšatisilymarin ekstraktiKvalitete. Potonji je posebno važan u pogledu primjene silymarina. Dobiveni ekstrakti silymarina, zapravo, mogu sadržavati toksične organske ostatke koje je potrebno ukloniti kako bi se zadovoljila prihvatljivost potrošača.
U pokušaju da se poboljša proces ekstrakcije silymarina i učini ga učinkovitijim i ekološki prihvatljivijim, nedavno je razvijena i primijenjena ekstrakcija otapala potpomognuta mikrovalnom pećnicom, ekstrakcija otapala potpomognuta ultrazvukom, ekstrakcija tekućine pod tlakom, ekstrakcija potpomognuta enzimom, ekstrakcija nadkritične tekućine, a posebno su akritička ekstrakcija vode poznata i kao metode ekstrakcije tople vode pod tlakom.
Materijali i metode
Biljni materijal
Sušeno voće S. marianum L. Gaertner kupljeno je u lokalnoj ljekarni (Lublin, Poljska) u jesen 2011. Dovoljno velik reprezentativni uzorak biljnog materijala (ca. 500 g) mljeven je i isijan kako bi se dobila veličina čestice od 0,4 mm. Precizno odvagnuti dijelovi materijala korišteni su za ekstrakcije.
Materijali i reagensi
Standardizirani suhi ekstrakt S. marianum L. Gaertner i silybin B (čistoće 98%), primijenjen kao standard, kupljen je od Sigma-Aldricha u Poljskoj. Aceton, etil acetat, fosforna kiselina, n-heksan (svi su analitičkog reagensa) i metanol (analitički reagens i HPLC razred) kupljeni su u Poljskoj kemijskoj tvornici (POCh, Gliwice, Poljska). Voda je pročišćena pomoću Milli-Q sustava iz Milliporea (Millipore, Bedford, MA, SAD). Neutralno staklo, dobiveno na poklon od lokalnih staklara (frakcija 0,4–0,6 mm), primijenjeno je kao sredstvo za raspršivanje u PLE ćeliji.
Ekstrakcija tekućine pod tlakom
PLE je izveden s Instrumentom Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, SAD). Biljni materijal (0,5 g) pomiješan je s inertnim materijalom (neutralno staklo) i stavljen u 22-2-L ćeliju za ekstrakciju nehrđajućeg čelika koja sadrži filtarski papir na dnu. Drugi krug filtarskog papira postavljen je na vrh stanice za ekstrakciju. Konačno, stanica je čvrsto zatvorena i stavljena u pećnicu za grijanje.
Sadržaj stanice je izvađen pod radnim tlakom od 60 bara. Na kraju procesa, izvađeni uzorak je ispran pomoću volumena otapala jednak 60% volumena stanice ekstrakcije. Konačno, uzorak je očišćen za 60 s nanošenjem dušika pod tlakom (150 psi.), a ekstrakt je prikupljen u staklenu bočicu od 60 mL s gumenom kapom obloženom teflonom. Volumen prikupljenog ekstrakta bio je između 25 i 31 mL, ovisno o gustoći pakiranja stanice ekstrakcije. Dobiveni ekstrakt prenesen je u volumetrijsku tikvicu od 50 mL i napunjen do volumena pomoću odgovarajućeg tipa otapala. Tri neovisna izvlačenja izvedena su pod istim uvjetima. Između trčanja, sustav je opran odgovarajućim otapalom za ekstrakciju.
PLE parametri koji se proučavaju bili su tip otapala (metanol, aceton i etil acetat), temperatura (50, 75, 100, 125 i 150 °C), vrijeme (5, 10, 15 i 20 min) i broj ciklusa ekstrakcije (1–5). Za PLE proces defattinga n-heksan je primijenjen kao otapalo, a parametri koji se proučavaju bili su temperatura (50 i 100°C) i vrijeme (5 i 10 min) uklanjanja lipida. Ekstrakti acetona i etil acetata isparili su do suhoće pod vakuumom i redissolved u metanolu prije kromatografske analize.
Ekstrakcija Soxhleta
Iscrpne ekstrakcije u Aparatima Soxhlet izvedene su pomoću 2,0 g dijelova materijala. Precizno izvagani uzorci prebačeni su u papirnati naniže. Napunjena naprstak je umetnuta u 100-mL Soxhlet ekstraktor. Ekstrakcije su izvedene u procesu u dva koraka (n = 3). U prvom koraku postupka biljni materijal je oklevetan za 6 h pomoću 75 mL n-heksana. U drugom, silymarin je izvađen za 5 h sa 75 mL metanola. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dobiveni ekstrakt prebačen je u volumetrijsku tikvicu od 100 mL, koja je naknadno napunjena do volumena metanolom. Obavljena su tri neovisna izvlačenja.
Kromatografska analiza ekstrakata
Mjerenja HPLC-a obavljena su na Dionex Liquid Chromatographu (Dionex Corp.) koji se sastoji od kućišta kromatografije (LC20) koje sadrži PEEK automatizirani ventil za ubrizgavanje opremljen petljom uzorka od 10 μL, pumpom za gradijent (GP50), detektorom apsorpcije (AD25) i detektorom fotodiodnog polja (PDA100). Cijeli kromatografski sustav bio je pod kontrolom sustava za prikupljanje podataka PeakNet6. Kromatografska odvajanja provedena su na 40 °C pomoću stupca Prodigy ODS-2 (5 μm, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, SAD). Mobilna faza A bila je mješavina metanola s otopinom akvasforne kiseline koja je sadržavala 0,5 0 2 od 75% fosforne kiseline u 100 2 otopine (35 : 65, v/v). Mobilna faza B bila je mješavina metanola s otopinom akvasforne kiseline koja je sadržavala 0,5 0 0 H 75% fosforne kiseline u 100 2 2 otopine (50: 50, v/v). Protok je bio 0,8 mL/min. Analize su provedene u gradijentu mobilne faze s postotkom B u A koji se mijenja na sljedeći način: početna koncentracija, 0%B; 28 min, 100%B; 35 min, 100%B, 36 min 0%B. Prije sljedeće analize, stup je kalibriran pomoću mobilne faze koja sadrži 0% B tijekom 20 minuta. Svaki ekstrakt je HPLC analiziran tri puta. Valna duljina za otkrivanje flavonolignana postavljena je na 288 nm, a za vršnu karakterizaciju zabilježeni su i UV-Vis spektri od 210 do 500 nm.
Kvalitativna analiza ekstrakata provedena je usporedbom vremena zadržavanja vrhova i njihovih UV-Vis spektra u ekstraktima s obzirom na one u standardiziranom uzorku suhog silymarina. Za pripremu standardizirane otopine suhog silymarina, 0,02-g dio uzorka koji sadrži 5,0 mg silybina A + B otopljen je u 50 mL metanola. Vrhovi za silychristin, silydianin, silybin A, silybin B, izosilybin A i B pojavili su se u vrijeme zadržavanja od 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 odnosno 34,8 min. Kvantitativna analiza temeljila se na standardu silybina B, a korištena je i vanjska standardna metoda. Kalibracijska krivulja nastala je iz pet koncentracija spoja u rasponu koncentracije od 0,1–1,0 mg/2. Obavljena su tri mjerenja vršnog područja za svaku koncentraciju standardnog rješenja. Karakteristični parametri dobivene kalibracijske krivulje bili su sljedeći: nagib, 0.516 i presretanje, 0.003. Utvrđeno je da je kalibracijska krivulja linearna u testiranom rasponu koncentracije. Utvrđeno je da je koeficijent korelacije >0,995 dolara. Zbog poteškoća u kupnji silychristin, silydianin, silybin A, izosilybin A i B standarda, količine tih spojeva izračunate su povezivanjem njihovih kromatografskih odgovora na kalibracijsku krivulju za silybin B.
Statistička analiza
Svi podaci izraženi su kao srednja ± standardna devijacija (SD). Analiza varijante (ANOVA) i F-testa korištena je za procjenu utjecaja PLE uvjeta na prinos silymarina. Srednje vrijednosti smatrale su se značajno različitima kada se rezultat uspoređenih parametara razlikovao na razini značaja P = 0,05. Kako bi se provjerio značaj svakog Fisherovog koeficijenta, korištene su P-vrijednosti.
Rezultate
Slika 1a predstavlja tipičan kromatogram PLE ekstrakta dobivenog iz plodova S. marianum L. Gaertner, dok slika 1b prikazuje kromatogram ekstrakcije silymarina iz otopine mlijeka čička pripremljene otapajući standardizirani suhi ekstrakt S. marianum L. Gaertner u metanolu (1 mg/2). Analizom kromatograma EKSTRAKATA PLE ili Soxhlet s onom za standardizirano rješenje (vrijeme zadržavanja, UV–Vis spektri i indeks vršne čistoće) dokazano je da primijenjeni kromatografski uvjeti omogućuju dovoljnu rezoluciju ispitanih spojeva, vršnih vrijednosti od 1 do 6, od komponenti matrice uzorka. Vrhovi su identificirani kao: (1) silychristin, (2) silydianin, (3) silybin A, (4) silybin B, (5) izosilybin A i (6) izosilybin B.
Kako izvući mlijeko čička?
Za razliku od većine bilja, mlijeko čička sjemenke ne jako ekstrakt dobro u vodi, tako da ne pokušavajte napraviti šalicu čaja od njih! Umjesto toga jedite svježe mljevene sjemenke ili nabavite kvalitetnu kapsulu. Ako koristite sjemenke kupite ih cijele, a zatim ih sameljite po potrebi (koristim mlinac za kavu kako bih ih napravio u grubi prah). Sjemenke imaju masni, slatki i gorak okus odjednom - možda su stečenog okusa, ali uopće nisu neugodne. Počnite s uzimanjem 1/2 do 1 žlice dnevno posute po hrani i pogledajte kakav vam je osjećaj, prilagođavajući količinu koliko vam je potrebno.
Sastojci
1 šalica mlake vode
1 šalica 100 dokaz alkohola koristim votku
3/4 do 1 šalica mlijeka čička sjeme tlo ako je moguće
Upute
Sterilizirajte masonsku staklenku koja se koristi stavljanjem u kipuću vodu oko 10 minuta ili stavljanjem na stalak u pećnici na oko 250 stupnjeva tijekom 15 minuta.
Ulijte sve sastojke u Mason staklenku.
Stavite novi poklopac na staklenku i čvrsto ga pričvrstite prstenom.
Snažno protresite staklenku oko 1 minutu.
Stavite staklenku na hladno tamno mjesto pet tjedana.
Svakodnevno protresite staklenku kako biste osigurali da sjemenke mliječne čička ne plutaju do vrha i potpuno se infundiraju alkoholom i vodom.
Na kraju određenog broja tjedana, procijedite mlijeko čička daleko od tekućine kroz fini mrežasti cjedlo - zadržavajući tekućinu. Ako nemate fini mrežasti cjedilo, upotrijebite mali cjedilo i/ili otisnite cjedilo s nekoliko filtera za kavu kako biste smanjili veličinu otvora.
Koliko dugo će mlijeko čička stupiti na snagu?
Mlijeko čička sjeme može zaštititi stanice jetre od otrovnih kemikalija i lijekova. Također se čini da imaju snižavanje šećera u krvi, antioksidans, i protuupalno djelovanje.
Poboljšanje oksidativnih stresnih parametara dosljedno je zabilježeno u šestomjesečnom trajanju liječenja specijaliziranim sustavom isporuke mlijeka čička (2). Poboljšanje oksidativnih stresnih obrazaca odgovorno je za poboljšanu inzulinsku signalizaciju i funkcioniranje jetrenih stanica.
Koliko dugo treba uzeti mlijeko čička? (Mlijeko čička DOZA)
Mlijeko čička se smatra sigurnom u dozama od 420 mg/dan u podijeljenim dozama do 41 mjeseci. Jedan izvor sugerira dnevne doze od 12 do 15 g suhog voća za dispepsiju i poremećaje bilijarnog sustava, dok se ekstrakt koji sadrži 200 do 400 mg/dan silymarina smatra učinkovitim kod različitih poremećaja jetre.
Mlijeko čička prednosti
1. Podržava zdravlje jetre
Jedna od najčešćih uporaba mlijeka čička je za liječenje problema s jetrom. A 2016 studija je pokazala da mlijeko čička poboljšana dijeta-inducirana oštećenja jetre u miševa. Više dokaza je potrebno dokazati da mlijeko čička koristi ljudske jetre na isti način. Međutim, istraživači teoretiziraju da se to dogodi. Aktivni sastojak u mlijeku čička, silymarin, djeluje kao antioksidans smanjenjem proizvodnje slobodnih radikala. Znanstvenici misle da to stvara detoksikacijski učinak, zbog čega je mlijeko čička može biti koristan za probleme s jetrom.
Dok se ne provodi više istraživanja, međutim, mlijeko čička se ne preporučuje kao primarna opcija liječenja za probleme s jetrom. Ali to može biti koristan komplementarni tretman za probati.
2. Promiče zdravlje kože
Mlijeko čička ulje može se koristiti topički za poboljšanje zdravlja kože.
Mlijeko čička može pomoći u promicanju zdrave kože. A 2015 studija je pokazala da mlijeko čička pomogao poboljšati upalne kožne uvjete kada se primjenjuje na kožu miševa.
Mlijeko čička je također utvrđeno da antioksidativni i protiv starenja učinak na ljudske stanice kože u laboratorijskom okruženju u drugoj studiji.
Daljnja istraživanja na ljudima je potrebno identificirati što koristi osoba može očekivati od nanošenja mlijeka čička na kožu.
3. Smanjuje kolesterol
Visoki kolesterol može dovesti do problema sa zdravljem srca i povećati šansu osobe za moždani udar.
A 2006 studija sugerira mlijeko čička može igrati važnu ulogu imajući razinu kolesterola prema dolje. Utvrđeno je da je razina kolesterola bila niža u ljudi koji su uzimali mlijeko čička za liječenje dijabetesa od onih koji su uzimali placebo.
4. Podržava mršavljenje
Početna istraživanja na životinjama provedena 2016. godine otkrila su da je silymarin uzrokovao gubitak težine kod miševa koji su hranjeni prehranom namijenjenom izazivanju debljanja.
To sugerira mlijeko čička može biti koristan za one koji žele izgubiti težinu. Više istraživanja o učincima mlijeka čička na mršavljenje u ljudi je potrebno potvrditi, Međutim.
5. Smanjuje otpornost na inzulin
Studija na miševima pronašao mlijeko čička ekstrakt pomogao smanjiti otpornost na inzulin. Inzulinska rezistencija je problem za osobe s dijabetesom tipa 2.
Iako ovo istraživanje sugerira mlijeko čička može igrati ulogu u upravljanju dijabetesom, više istraživanja je potrebno potvrditi da li mlijeko čička smanjuje otpornost na inzulin i podržava upravljanje dijabetesom.
6. Poboljšava simptome alergijske astme
Aktivni sastojak u mlijeku čička može pomoći smanjiti upalu. Studija iz 2012. godine otkrila je da je silymarin pomogao u zaštiti od upala u dišnim putevima miševa s alergijskom astmom.
Više istraživanja je potrebno vidjeti ako silymarin koristi simptome astme u ljudi.
7. Ograničava širenje raka
Mlijeko čička može pomoći u zaustavljanju širenja određenih vrsta raka. A 2016 pregled utvrdio da mlijeko čička ekstrakt inhibirao rast kancerogenih stanica u kolorektalnog raka.
Više istraživanja je potrebno utvrditi kako mlijeko čička može se koristiti za borbu protiv raka.
8. Podržava zdravlje kostiju
Mlijeko čička čaj može pomoći da se spriječi gubitak kosti uzrokovan nedostatkom estrogena. Mlijeko čička može igrati bitnu ulogu u podržavanju zdravlja kostiju. A 2013 studija je pokazala da mlijeko čička pomogao spriječiti gubitak kostiju. Studija je posebno istražila gubitak kosti uzrokovan nedostatkom estrogena. Još nije jasno je li mlijeko čička jednako korisno za gubitak kostiju s drugačijim uzrokom. Daljnje studije su potrebne prije nego što je sigurno zaključiti da mlijeko čička podržava zdravlje kostiju u ljudi.
9. Poboljšava spoznaju
A 2015 studija je pokazala da mlijeko čička povećana otpornost na oksidativni stres. Oksidativni stres je potencijalni uzrok Alzheimerove bolesti.
Na taj način, mlijeko čička može pomoći poboljšati spoznaju i liječiti degenerativna stanja koja utječu na um. Više istraživanja na ljudima je potrebno potvrditi učinke mlijeka čička na spoznaje.
10. Pojačava imunološki sustav
Mlijeko čička može pomoći ojačati imunološki odgovor osobe i pomoći im u borbi protiv infekcije.
A 2016 studija na životinjskom modelu otkrili da mlijeko čička ekstrakt poboljšati imunitet kada se konzumira. Starija studija pokazala je da ekstrakt mliječne čička ima pozitivan učinak na imunološki odgovor kod ljudi.
Više studija s ljudskim sudionicima su potrebne prije nego što znanstvenici mogu sa sigurnošću reći da mlijeko čička pojačava imunološki sustav osobe.
Mlijeko čička nuspojave
Mlijeko čička čini se da imaju malo nuspojava, Čak i kada se uzima za nekoliko godina. Neki ljudi imaju mučninu, proljev, svrbež, i nadutost.
Za skupno mlijeko čička u prahu, obratite nam se naherbext@undersun.com.cn
Reference:https://academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
